位于凤凰街定慧寺巷34号，1982年被列为苏州市文物保护单位。唐咸通间为盛楚所创般若院子院，五代吴越钱氏时仍属罗汉院，北宋雍熙间称西方院，大中祥符间赐额定慧禅寺，才与寿宁万岁禅院（双塔寺）分为两寺。元末毁于兵火。明洪武中僧泽藏山、景新、惠泽，永乐中僧净因，先后重建。宣德九年（1434年）得知府况钟捐助，正统二年（1437年）重建大雄宝殿。清康熙初渐形倾圮，十一年（1672年）僧大休驻锡，里人唐尧仁捐资重建观音殿，重修大殿、弥勒殿。道光间殿宇失修，十六年（1836年）邑人顾沅等集资修葺。咸丰十年（1860年）至同治二年（1863年），因战争被毁。同治三年僧本修师徒相继募修地藏、天王各殿。1926年僧灵馨募修。宋代著名文学家苏轼与定慧寺主持僧守钦友善，往来苏州必寄寓寺中。绍圣初，苏轼贬谪惠州，与留居宜兴之长子苏迈音讯阻隔，守钦遣徒卓契顺携带苏迈书信长途跋涉至惠州探视，并赠《拟寒山十颂》诗。苏轼和诗八首答谢，又书陶渊明《归去来辞》赠卓契顺。明正统四年，巡抚周忱为苏轼所书《归去来辞》墨本题跋，命主持摹勒上石，陷于寺壁。知府况钟建啸轩纪念苏轼。清道光十四年，按察使李彦章倡议，苏州官绅集资于寺北建苏公祠。